农药学学报2008,10(2):1662171ChineseJournalofPesticideScience・专栏・蔬菜中灭蝇胺残留的强阳离子交换固相萃取柱净化2液相色谱分析刘新艳1,潘灿平2,刘肃31(1.农业部蔬菜品质监督检验测试中心(北京),北京100081;2中国农业大学理学院,北京100193)摘要:建立了简单、快速测定蔬菜中灭蝇胺残留量的方法。蔬菜样品经乙酸胺2乙腈(1∶4,体积比)混合溶液提取,强阳离子交换固相萃取(SCX2SPE)柱净化后,采用高效液相色谱仪在波长215nm处测定,所用色谱柱为AgilentNH2,流动相为乙腈2水溶液(97∶3,体积比),以1.0mL/min的流速等梯度洗脱。结果表明,在浓度为0.02～2mg/L范围内,线性相关系数为0.9999。灭蝇胺的添加浓度在0.05～0.4mg/kg范围内,平均回收率为83.4%～104%,相对标准偏差为1.7%～8.4%,均在农药残留测定所允许的范围内。该方法的最低检出限(LOD)为0.02mg/kg,最低检测浓度(LOQ)为0.05mg/kg。关键词:灭蝇胺;农药残留;强阳离子交换(SCX);高效液相色谱中图分类号:O657.72;X592文献标志码:A文章编号:100827303(2008)0220166206DeterminationofCyromazineResidueinVegetablesbyStrongCationExchange2SolidPhaseExtractionandHighPerformanceLiquidChromatographyLIUXin2yan1,PANCan2ping2,LIUSu31(1.SupervisionandTestingCenterforVegetableQuality,MinistryofAgriculture,Beijing10081,China;2.DepartmentofAppliedChemistry,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China)Abstract:Asimpleandrapidmethodwasdevelopedfortheresiduedeterminationofcyromazine.Cyromazineinvegetablesampleswasextractedbythemixedsolutionofammoniumacetateandacetonitrile,followedbycleanupwithstrongcationexchange2solidphaseextraction(SCX2SPE).TheelutionwasdeterminedbyHPLCin215nm.Inthemethod,cyromazinewasanalyzedonanAgilentNH2column,usingamixtureofacetonitrile2water(97∶3,V/V)asthemobilephasewithaflowrateof1.0mL/min.Thecorrelationcoefficientintheconcentrationrange0.02～2mg/Lwas0.9999.Theaveragerecoveriesofcyromazineinvegetablesat0.05,0.2,0.4mg/kgfortificationlevelwere83.4%～104%,andtherelativestandarddeviations(RSD)were1.7%～8.4%.Thelimitofdetection(LOD)ofthismethodis0.02mg/kg,andthelimitofquantitation(LOQ)reaches0.05mg/kg.Keywords:cyromazine;pesticideresidue;strongcationexchange(SCX);highperformanceliquidchromatography收稿日期:2008205202;修回日期:2008205230.作者简介:刘新艳(19812),女,山东省菏泽市人,硕士,主要从事农药分析化学研究,E2mail:xyliu8112@163.com;3通讯作者(Authorforcorrespondence):刘肃(19552),男,北京市人,研究员,主要从事农产品质量安全与标准制定研究.联系电话:*********532;E2mail:liusu@mail.caas.net.cn基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAK02A04);北京市科技新星计划(2005A59)资助.No.2刘新艳等:蔬菜中灭蝇胺残留的强阳离子交换固相萃取柱净化2液相色谱分析灭蝇胺(cyromazine),化学名称:N2环丙基21,3,52三嗪22,4,62三胺,结构式如(Ⅰ)。

灭蝇胺为强内吸特异性昆虫生长调节剂,对双翅目害虫具有特殊生物活性,可使幼虫在形态上发生畸变,使成虫羽化不全或受抑制,是豆类、蔬菜等作物上防治斑潜蝇的优良药剂,是无公害蔬菜化学防治的首选品种。本品具有触杀作用,叶面施用时能有效防治蔬菜、马铃薯和观赏作物上的潜蝇,也可用于防治动物身上的苍蝇[1,2]。灭蝇胺以其低毒性、低残留、高防效、持效期长、环境相容性好等特点,得到了世界范围内的认可,目前已经广泛应用于蔬菜蝇蛆的防治。GB2763—2005《食品中农药最大残留限量》[3]已规定灭蝇胺的限量指标,在黄瓜中的最大残留限量值(MRL)为0.2mg/kg。国内的文献报道和检测标准,大多数是关于灭蝇胺在饲料和畜产品中的残留测定[4～8],很少涉及到蔬菜中的残留分析。灭蝇胺既可以用气相色谱 ( GC ) 检测, 也可以用高效液相色谱 ( HPLC ) 检测。美国 FDA[ 9 ]和日本厚生劳动省[ 10 ]采用的残留检测方法均为HPLC法, 但前处理方法繁琐, 样品净化需经过阳离子交换和阴离子交换。CHOU 等人[ 11～15 ]报道了用 HPLC、GC 和 GC2MS 检测禽肉、蛋、土壤等中灭蝇胺残留的方法。

液相色谱配紫外检测器的分析方法具有较广的适用性, 作者参考以上分析方法, 对蔬菜中灭蝇胺的提取、净化和色谱条件等做进一步优化, 得到了较好的线性范围、添加回收率、最低检出限等数据。该方法原理为: 样品中的灭蝇胺经乙酸铵2乙腈混合溶液提取、强阳离子交换固相萃取 ( SCX2SPE)柱净化后, 用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长 215 nm 处测定, 根据色谱峰的保留时间定性, 外标法定量。1材料与方法1. 1仪器与试剂高效液相色谱仪, 配二级管阵列检测器(DAD )和可变波长检测器 ( VWD ) (美国 A gilent公司) ; 色谱柱为 A gilent NH2( 250 mm ×4. 6 mm,5μm ) ; M ettler A E240 型 万分之一天平 [梅特勒仪器 (上海)有限公司 ]; M ettler Toledo PL 6022S型电子天平 [梅特勒2托利多仪器 (上海 )有限公司 ];组织捣碎机 (荷兰 Philips公司 ) ; 均质器, 6 000～36 000 r /m in (德国 IKA 公司) ; 旋转蒸发仪 (瑞典BUCH I公司 ) ; TTL 2DC II型氮吹仪 (北京同泰联科技发展有限公司 ) ; TTL 210超纯水器 (北京同泰联科技发展有限公司 ) ; 强阳离子交换萃取柱( C leanert SCX) : 规格 500 mg / 6 mL (北京艾杰尔科技有限公司) 。

灭蝇胺 ( cyromazine) 标样, 纯度 ≥95% (美国D IKMA 公司 ) ; 乙腈、甲醇, 色谱纯 (美国 J. T.B aker公司 ) ; 乙酸铵, 分析纯; 盐酸、氨水, 优级纯。1. 2实验方法1. 2. 1溶液配制1. 2. 1. 1乙酸铵溶液 [ c(CH3COONH4)= 0. 05 mol /L ]称取 7. 70 g 乙酸铵, 用适量水溶解后转移至2 L容量瓶中, 加水定容至刻度。1. 2. 1. 2乙酸铵2乙腈溶液 [ ψ(0. 05 mol/L CH3COONH4+ CH3CN)= 1 + 4 ] 量取 200 mL 乙酸铵溶液至 1 L 容量瓶中, 用乙腈定容至刻度。1. 2. 1. 3盐酸溶液 [ c( HC l)= 0. 1 mol /L ] 吸取8. 5 mL盐酸 (含量 36% ～38% ) 至 1 L 容量瓶中,用水定容至刻度。1. 2. 1. 4灭蝇胺标准溶液 称取灭蝇胺标准品0. 01g (精确至 0. 0001g)于 10 mL 容量瓶中, 用乙腈定容, 得到质量浓度为 1 000 mg /L 的母液。按照试验设计要求, 用乙腈稀释并配制成各浓度的标准工作溶液, 4℃保存, 备用。

1. 2. 2试样制备与保存 考虑到蔬菜品种的多样性, 作者从七大类蔬菜品种中分别选取番茄、黄瓜、结球甘蓝、大白菜、芹菜、菜豆和白萝卜作为茄果类、瓜类、甘蓝类、白菜类、绿叶菜类、豆类和根菜类的代表样品。取蔬菜样品可食部分, 用干净纱布轻轻擦去样本表面的附着物, 切碎, 充分混匀, 用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆样品放入聚乙烯瓶中于 - 16 ℃～- 20 ℃下保存。称取样品时, 常温样品应搅拌均匀; 冷冻样品先解冻再混匀。1. 2. 3提取与浓缩称取匀浆试样 20 g (精确至0. 01 g)于 150 mL 烧杯中, 加入 50 mL 乙酸铵2乙腈溶液 ( 1∶4, 体积比, 下同) , 以 14 000 r /m in均质2 m in, 均质液经铺有滤纸的布氏漏斗抽滤至7 6 1农药学学报 Vol. 10100 mL 具塞比色管中, 再用 35 mL 上述乙酸铵2乙腈溶液涮洗烧杯和均质器刀头, 以 14 000 r /m in均质 30 s, 洗液一并滤入上述 100 mL 具塞比色管中, 并用乙酸铵2乙腈溶液定容。盖上塞子, 将滤液混合均匀。用移液管准确吸取 10 mL 提取液至150 mL 圆底烧瓶中, 在旋转蒸发仪上 (水浴温度40 ℃)浓缩至只含水的溶液, 用 0. 1 m ol /L 的盐酸溶液调节 pH = 2, 待净化。

1. 2. 4净化 依次用甲醇、水各 5 mL 预淋活化SCX2SPE萃取柱, 当溶剂液面到达柱吸附层表面时, 立即将 1. 2. 3 节所得溶液转移至 SCX2SPE萃取柱 中, 弃 去 流 出 液。用 3 mL 盐 酸 溶 液( 0. 1 mol /L )将圆底烧瓶中的残余物洗入 SCX2SPE萃取柱中, 并重复一次。然后依次用水、甲醇各 5 mL 淋洗萃取柱, 弃去淋出液并将小柱抽干。用 5 mL 氨水2甲醇 ( 5 ∶95, 体积比 ) 溶液洗脱萃取